朴树叶中其它成分,朴树枝、皮中有关组分是否能对银杏酸具有减毒作 用,具有减毒效果的组分中具体成分是什么等系列问题仍需开展大量的深入研究。为此,本研究对 银杏酸的潜在毒副作用展开了探索,对朴树叶、枝和皮中活性成分进行了提取和分离,比较了这些组 分对银杏酸的减毒作用,筛选出能够减弱银杏酸的肝细胞毒性和抑制 T 细胞介导的炎症反应的活性 组分,以期为进一步研究获得对银杏酸具有减毒作用的具体成分( 或系列成分) 及其作用机制提供基 础数据。Agilent 1260 高效液相色谱( HPLC) 仪,安捷伦 XDB-C18 色谱柱( 250 mm × 4. 6 mm,5 μm) ,美国安 捷伦公司; SpectraMax190 酶标仪,美国 Molecular Devices 公司; KH3200B 型超声波清洗器,昆山禾创超 声仪器有限公司。
将朴树叶进行除尘、晾干并烘干后,置于粉碎机中进行粉碎,粉碎成 0. 38 mm。 向 100 g 朴树叶粉末中加入 100 mL 乙醇,静置过夜,次日按料液比1 ∶ 4( g ∶ mL) 补加 70% 乙醇,于 50 ℃ 回流提取 3 次,每次提取 2 h。合并提取液经旋转蒸发除去乙醇,用体积比 1 ∶1 的二氯甲烷萃取 3 次,得 到二氯甲烷萃取组分( CH2Cl2 ) ; 然后,水溶液用乙酸乙酯萃取 3 次,得到乙酸乙酯萃取组分( EA) ; 最 后,水溶液用正丁醇萃取 3 次,得到正丁醇萃取组分( BA) ; 剩下的为水溶性组分( Water) 。过敏反应的 本质为炎症,炎症的发生与淋巴细胞的活化 和过度增殖密切相关,淋巴细胞过度增殖就 会导致淋巴器官肿大。将总银杏酸注射到小鼠足垫,7 天后取足垫附近的腘窝淋巴结观察,发现银 杏酸可导致淋巴结肿大。与注射等体积溶剂的对照组比较,注射了银杏酸的实验组小鼠的 腘窝淋巴结质量显著升高; 摘取淋巴结,分离淋巴细胞并计数,发现注射银杏酸可导致淋巴结中淋巴细 胞数目显著增多。